• StarPure质粒小提试剂盒(膜柱法)
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StarPure质粒小提试剂盒(膜柱法)

No.FS-B1702

StarPure质粒小提试剂盒(膜柱法)是基于膜柱法的质粒提取技术,配合优化的缓冲体系可实现高纯度质粒 DNA 的提取和纯化。所提取的质粒 DNA 可用于各种分子生物学下游实验,如测序、文库筛选、酶切、连接和转化等。本试剂盒无需使用有毒有机溶剂(如酚、氯仿等), 提取过程操作简单。

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产品描述

产品优势:

  1. 质粒提取效率高,质量好;
  2. 高纯度,无RNA残留;

产品性能:

  1. 提取量高于市面竞品

将含5 kb,3 kb和2 kb不同质粒大小的DH5α菌株在LB培养基中培养至OD600≈2.5,分别用不同厂家的质粒提取试剂盒进行提取,每个样本为1 mL菌液,
最终质粒洗脱体积都为50 μL。启衡星提取的质粒浓度及产量高于其它厂家。



  1. 提取产物纯度高,无基因组及RNA污染。

将含5 kb,3 kb和2 kb不同质粒大小的DH5α菌株在LB培养基中培养至OD600≈2.5,分别用不同厂家的质粒提取试剂盒进行提取,每个样本为1 mL菌液,
质粒洗脱体积为50 μL。提取产物进行电泳,无基因组和RNA污染,纯度高。



产品组分:

                组分名称

    FS-B1702-S

    FS-B1702-01

   储存温度

    10 preps

     50 preps

Resuspension Buffer (P1)

2.5 mL

12.5 mL

RT

Lysis Buffer (P2)

2.5 mL

12.5 mL

RT

Extraction Buffer(P3)

2.5 mL

12.5 mL

RT

DNA吸附柱 & 收集管

10 个

50个

RT

RNase A

50 μL

250 μL

RT

Elution Buffer

1 mL

5 mL

RT


实验前准备:

自备试剂:异丙醇(Isopropanol)、75% 乙醇(Ethanol)。

操作步骤:

以下操作流程以OD600≤4的大肠杆菌培养液1~2 mL为例,若OD600过高或菌液量增加,可酌情增加试剂体积,但需要保证Resuspension Buffer、 Lysis Buffer和Extraction Buffer的比例不变,以免影响提取效果。

  1. 取1~2 mL细菌培养液置于离心管中,放入离心机于12000 rpm 离心2min或4000 rpm离心10 min,彻底弃去上清液。
  2. 将离心管从离心机中取出,加入250 μLResuspension Buffer(P1) 和5 μL RNase A,涡旋混匀至沉淀完全悬浮,溶液呈白色浑浊。
  3. 加入250 μL Lysis Buffer(P2),上下翻转颠倒数次,不要涡旋混匀,放置1 min(可观察破碎状态,若菌液浓度太高,可延长裂解时间至最长10 min)。
  4. 加入250 μLExtraction Buffer(P3),上下翻转颠倒数次,放置5 min。
  5. 4℃12000 rpm离心10 min或4000 rpm离心20 min,移取上清液约550 μL至干净的离心管备用,注意尽量避开上清液中可能残留的少量浮沫(浮沫过多可再次离心去除),移取时少量杂质残留会在后续步骤洗涤去除,不会影响产物纯度。
  6. 向步骤5中的离心管(含上清液)中,加入250 μL异丙醇涡旋混匀后,将液体转移支DNA吸附柱中(DNA吸附柱置于收集管中)室温静置孵育10min, 
  7. 12,000 rpm离心1min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
  8. 加入600 μL75%乙醇,12,000 rpm离心 1 min,倒掉收集管中的废液。
  9. 重复步骤 8一次。
  10. 将吸附柱重新放回收集管中,12,000 rpm离心1min。 注意:这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除,乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。
  11. 将吸附柱置于一个新的收集管中,向吸附膜的中间部位加入50-100μL Elution Buffer,室温放置2-5分钟,12,000 rpm离心2 min,将质粒溶液收集到离心管中。-20℃保存质粒。

 











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