江南大学刘龙老师团队近期在《Nucleic Acids Research》(IF16.6)上发表了《A cross-species inducible system for enhanced protein expression and multiplexed metabolic pathway fine-tuning in bacteria》文章,启衡星王牌产品StarLighter HotStart Taq Pro PCR Mix(FS-P5001,StarLighter 热启动 Taq Pro PCR预混液)有幸参与其中,为该研究贡献一份力量!
文章中研究人员选择了9个已报道的诱导系统,包括IPTG诱导系统和木糖诱导系统。通过理性设计和随机突变重构这些系统,使其在不同菌株中有效表达。通过引入突变抑制子表达文库,进一步优化诱导系统,减少泄漏表达。将诱导系统放置在质粒和基因组上,测试其在大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和谷氨酸棒状杆菌中的表达性能。最后成功构建了两个跨物种诱导系统:2,4-二乙酰基间苯三酚(DAPG)诱导系统PphlF3R1和无水四环素(aTc)诱导系统Ptet2R2*。通过优化,P_tet2R2*在所有三种菌株中表现出了低泄露、宽动态范围、足够的表达强度和适当的敏感性。这个系统被用来有效调控各种报告蛋白(sfGFP、mCherry和mScarlet3)和基因簇(crtEIB、crtEIBY和vioABCDE)的表达。此外,基于T7 RNA聚合酶(T7 RNAP)和dCas12a的单输入基因回路被开发出来,用于同时激活和抑制基因表达。